十大功勞屬(Mahonia)植物在我國(guó)約有50種，分布于南方各地。該屬植物主要以根、莖入藥，稱“刺黃連、刺黃柏、功勞木”等；有的地區(qū)以葉入藥，稱“功勞葉”〔1，2〕。有的用作提取“黃連素”、異漢防己甲素(isotetrandrine)的原料。已從該屬植物中發(fā)現(xiàn)20多種芐基異喹啉類生物堿，其中雙芐基異喹啉類的尖刺堿(oxyacanthine,Ⅰ)、小檗胺(berbamine,Ⅱ)、異漢防己甲素(Ⅴ)和原小檗堿類的小檗堿(berberine,Ⅶ)、藥根堿(jatrorrhizine,Ⅳ)、巴馬亭(palmatine,Ⅵ)、非洲防己胺(columbamine,Ⅲ)等成分分布廣泛，含量較高?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用結(jié)果表明，這些成分具有抗菌、消炎、抗病毒、降血壓、降血脂、抗心率失常、抗血小板聚集、抗衰老、鎮(zhèn)痛等生理活性〔3～11〕。
　　對(duì)十大功勞屬植物中生物堿成分測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道較少。有文獻(xiàn)報(bào)道用薄層掃描法測(cè)定大葉刺黃柏中的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ〔12〕；用薄層光密度法測(cè)定4種十大功勞屬植物莖中的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、木蘭花堿(magnoflorine)〔13〕；用高效液相色譜法測(cè)定十大功勞葉中的Ⅶ〔14〕。作者在用變波長(zhǎng)高效液相色譜法測(cè)定了小檗屬(Berberis)植物根中的生物堿的基礎(chǔ)上〔15〕，為了開(kāi)發(fā)利用十大功勞屬植物資源，建立了高效液相色譜法測(cè)定十大功勞屬植物中的Ⅰ～Ⅶ的方法。這7種成分可用203 nm固定波長(zhǎng)1次檢測(cè)，也可用203～346nm變波長(zhǎng)2次檢測(cè)。但后者既使7種待測(cè)成分在各自的最大吸收波長(zhǎng)處檢測(cè)，又避免了吸收波長(zhǎng)不同的相鄰色譜峰的干擾，提高了分析的靈敏度和準(zhǔn)確度。本文用變波長(zhǎng)高效液相色譜法對(duì)我國(guó)產(chǎn)的十大功勞屬3種植物的根、根皮、根木、莖皮、莖木和10種不同產(chǎn)地的植物根中的Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ進(jìn)行了定量分析，Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ因?qū)φ掌妨可?，只做了定性分析?br>
　　1 儀器與試藥
　　Waters高效液相色譜儀(510型泵，490E檢測(cè)器，U6K進(jìn)樣器，Baseline 810色譜工作站)。
　　對(duì)照品：鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬亭、鹽酸藥根堿購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；非洲防己胺由中國(guó)藥品生物制品檢定所涂國(guó)士研究員贈(zèng)送；小檗胺購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院林業(yè)土壤研究所，經(jīng)重結(jié)晶純化；尖刺堿、異漢防己甲素由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所提供(所用對(duì)照品經(jīng)硅膠薄層層析、2種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)為單點(diǎn)；高效液相色譜法測(cè)定，主成分的峰高、峰面積均在97%以上)。植物標(biāo)本由中國(guó)科學(xué)院植物研究所應(yīng)俊生研究員鑒定。乙腈為色譜純，甲醇和磷酸二氫鉀為分析純，去離子水。

　　2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
　　2.1 色譜條件〔15〕
　　色譜柱：μ-Bondapak phenyl(10μm，3.9mm×300mm，美國(guó)Waters公司)；流動(dòng)相：0.02mol.L-1磷酸二氫鉀-乙腈(7∶3)；柱溫：室溫；流速：1.0mL.min-1；靈敏度：0.08AUFS；檢測(cè)波長(zhǎng)：固定波長(zhǎng)用203nm，變波長(zhǎng)0.0～10.0min用203nm，10.0min以后用346 nm。7種生物堿對(duì)照品的色譜圖見(jiàn)圖1。

　　圖1 7種生物堿對(duì)照品的色譜圖(203 nm檢測(cè))
　?、?尖刺堿 Ⅱ.小檗胺 Ⅲ.非洲防己胺Ⅳ.藥根堿
　　Ⅴ.異漢防己甲素 Ⅵ.巴馬亭 Ⅶ.小檗堿

　　2.2 回歸方程及線性范圍
　　按文獻(xiàn)〔15〕，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積(microvolt-sec)為縱坐標(biāo)(Y)，求得回歸方程見(jiàn)表1。
　　2.3 樣品溶液的制備
　　精密稱取干燥樣品粉末0.1g于50mL磨口三角瓶中，加甲醇20mL，稱重，浸泡12h，超聲提取60min，稱重，補(bǔ)足損失的甲醇，搖勻，密閉，靜置；取5.0mL上清液于離心管中，密閉，離心(10000r.min-1，10min)；取上清液(2.0mL)作為樣品溶液。

　　表1 4種生物堿定量分析的回歸方程和線性范圍

　　成分
　　回歸方程
　　r
　　線性范圍/μg

　?、?br>　　Y=9.017X×104+4.318×105
　　0.9993(n=7)
　　0.019～0.296

　?、?br>　　Y=4.239X×104-8.228×104
　　0.9999(n=9)
　　0.019～0.996

　?、?br>　　Y=4.191X×104+1.446×105
　　0.9998(n=9)
　　0.020～1.008

　　Ⅶ
　　Y=4.209X×104+1.278×105
　　0.9998(n=9)
　　0.020～1.010

　　2.4 精密度試驗(yàn)〔15〕
　　精密吸取一樣品溶液10μL進(jìn)樣，重復(fù)測(cè)定10次。求得樣品中各成分濃度(μg.mL-1)的RSD(%)：小檗胺 0.28，藥根堿 0.84，巴馬亭 0.75，小檗堿 1.21。
　　2.5 加樣回收率試驗(yàn)
　　分別精密稱取狹葉十大功勞莖的干燥粉末0.05g5份于50mL磨口三角瓶中，按文獻(xiàn)〔15〕操作，每份重復(fù)測(cè)定3次；計(jì)算Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ的回收率，分別為97.2%～102.1%、98.9%～100.3%、97.2%～100.1%、99.4%～100.1%，RSD分別為2.0%、0.62%、1.3%、0.30%。
　　2.6 樣品分析〔15〕
　　精密吸取樣品溶液10μL進(jìn)樣，用203～346nm變波長(zhǎng)檢測(cè)，對(duì)Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ進(jìn)行了定量分析，對(duì)Ⅰ、Ⅲ定性分析。再精密吸取10μL進(jìn)樣，用203nm固定波長(zhǎng)檢測(cè)，得到各樣品的特征圖譜，并定性分析成分Ⅴ。對(duì)十大功勞屬3種植物的根、根皮、根木、莖皮、莖木和10種不同產(chǎn)地的植物根中的7種生物堿的分析結(jié)果見(jiàn)表2、3。

　　3 討論
　　3.1 本文建立的方法能在同一個(gè)色譜條件下25min

　　表2 3種十大功勞屬(Mahonia)植物不同部位7種生物堿分析結(jié)果(%，n=2)

　　植物名稱
　　部位
　?、?br>　　Ⅱ
　?、?br>　　Ⅳ
　?、?br>　　Ⅵ
　?、?br>
　　甘平十大功勞 Mahonia eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford
　　(四川省中藥學(xué)校)
　　根
　　-
　　±
　　+
　　0.68
　　+
　　0.05
　　0.78

　　根皮
　　+
　　0.01
　　-
　　1.66
　　+
　　0.14
　　3.76

　　根木
　　+
　　±
　　+
　　0.69
　　+
　　0.06
　　0.84

　　莖皮
　　-
　　±
　　-
　　0.34
　　+
　　0.05
　　0.47

　　莖木
　　+
　　±
　　-
　　0.53
　　+
　　0.08
　　0.21

　　狹葉十大功勞 M.fortunei(Lindl.)Fedde
　　(重慶南川藥物種植所)
　　根
　　+
　　0.34
　　+
　　1.17
　　+
　　0.06
　　1.27

　　根皮
　　+
　　0.98
　　+
　　3.02
　　+
　　0.20
　　3.54

　　根木
　　+
　　0.18
　　+
　　0.54
　　+
　　±
　　0.70

　　莖皮
　　+
　　0.29
　　+
　　1.47
　　+
　　0.19
　　0.41

　　莖木
　　+
　　0.28
　　+
　　0.98
　　+
　　0.05
　　1.36

　　長(zhǎng)苞十大功勞 M.longibracteata Takeda
　　(四川峨邊)
　　根
　　+
　　±
　　+
　　0.40
　　+
　　0.62
　　1.73

　　根皮
　　+
　　±
　　+
　　1.10
　　+
　　1.30
　　6.94

　　根木
　　-
　　±
　　+
　　0.33
　　+
　　0.80
　　0.98

　　莖皮
　　-
　　±
　　+
　　0.74
　　-
　　0.60
　　1.24

　　莖木
　　-
　　-
　　+
　　0.21
　　-
　　0.28
　　0.45

　　+：檢出該成分 -：未檢出該成分 ±：含量＜0.01%

　　表3 10種十大功勞屬(Mahonia)植物根中7種生物堿分析結(jié)果(%，n=2)

　　植物名稱
　　產(chǎn)地
　?、?br>　?、?br>　　Ⅲ
　?、?br>　?、?br>　?、?br>　?、?br>
　　闊葉十大功勞 Mahonia bealei(Fort.)Carr.
　　四川峨邊
　　+
　　±
　　+
　　0.44
　　+
　　0.78
　　1.44

　　重慶奉節(jié)
　　+
　　0.02
　　+
　　0.50
　　+
　　0.64
　　2.07

　　鼠刺十大功勞 M.bodinieri Gagnep.
　　重慶金佛山
　　+
　　0.10
　　+
　　0.81
　　+
　　0.09
　　0.77

　　重慶藥物種植所
　　+
　　0.08
　　+
　　0.79
　　+
　　0.06
　　1.11

　　重慶中藥研究院
　　+
　　±
　　+
　　0.41
　　+
　　0.05
　　0.78

　　湖南新化*
　　+
　　±
　　+
　　0.16
　　+
　　0.53
　　1.44

　　川鄂十大功勞M.eurybracteata Fedde subsp.eurybracteata
　　四川峨眉山
　　-
　　±
　　+
　　0.45
　　+
　　0.14
　　1.10

　　四川峨邊
　　-
　　±
　　+
　　0.82
　　+
　　0.12
　　1.22

　　重慶縉云山
　　+
　　±
　　+
　　0.35
　　+
　　0.02
　　0.73

　　甘平十大功勞 M.eurybracteata Fedde subsp.ganpinensis(H.Leveill)T.S.Ying et Boufford
　　重慶南川
　　+
　　0.01
　　+
　　1.01
　　+
　　0.04
　　1.58

　　四川省中藥學(xué)校
　　-
　　±
　　+
　　0.68
　　+
　　0.05
　　0.78

　　狹葉十大功勞 M.fortunei(Lindl.)Fedde
　　重慶藥物種植所
　　+
　　0.34
　　+
　　1.17
　　+
　　0.06
　　1.27

　　四川峨眉山
　　+
　　±
　　+
　　0.82
　　+
　　0.06
　　1.42

　　湖南新化*
　　+
　　0.19
　　+
　　0.88
　　+
　　0.07
　　0.59

　　細(xì)梗十大功勞 M.gracilipes(Oliv.)Fedde
　　四川峨眉山
　　-
　　±
　　+
　　0.67
　　+
　　0.15
　　0.99

　　長(zhǎng)苞十大功勞M.longibracteata Takeda
　　四川峨邊
　　+
　　±
　　+
　　0.40
　　+
　　0.62
　　1.73

　　巖紫黃 M.nitens Schneid.
　　四川峨眉山
　　-
　　0.02
　　+
　　1.05
　　+
　　0.17
　　0.55

　　多齒十大功勞 M.polyodota Fedde
　　四川峨眉山
　　-
　　0.02
　　+
　　0.67
　　+
　　0.10
　　0.52

　　重慶金佛山
　　-
　　0.01
　　+
　　0.22
　　+
　　0.13
　　0.30

　　M.sp.(未定種名)
　　重慶金佛山
　　-
　　0.01
　　+
　　0.28
　　+
　　1.38
　　1.30

　　+：檢出該成分 -：未檢出該成分 ±：含量＜0.01% *：測(cè)定部位是莖

　　內(nèi)測(cè)定十大功勞屬植物不同部位以及不同產(chǎn)地植物中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ 3種雙芐基異喹啉類和Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ 4種原小檗堿類生物堿。方法的重現(xiàn)性好、精密度高、適用范圍廣。
　　3.2 十大功勞屬與小檗屬植物親緣關(guān)系相近，化學(xué)成分相似。研究結(jié)果表明：能用相同或相近的HPLC色譜條件測(cè)定這兩屬植物中相同的生物堿成分。
　　3.3 在所測(cè)定的10種植物中，Ⅲ的峰很低，參照Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ的分子結(jié)構(gòu)和峰面積，推測(cè)Ⅲ的含量低于0.01%。Ⅰ和Ⅱ除狹葉十大功勞外，在其余植物中的峰較弱，含量較低；Ⅴ的峰在大多數(shù)植物中很強(qiáng)，含量高(本實(shí)驗(yàn)中因?qū)φ掌妨可?，未定?。
　　3.4 這7種成分在該屬植物不同部位中的分布、含量有一定差別，其差異程度隨植物種類不同而異。含量基本上以根皮中最高，莖皮中次之，然后是根木部、莖木部。以往多以莖入藥〔1〕，但從分析結(jié)果看，其根也是不可忽視的資源。

　　作者單位：呂光華 華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都610044
　　王立為 陳立民 肖培根 中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所北京100094

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